《少女地狱的毒娘》是一款日系二次元风格的动作RPG游戏。少女地狱的毒娘游戏中，每有一位少女就有一座地狱，而地狱中有少女的思念所化的毒沼。主人公是一名男性，他的一只手臂只剩下了骨头。玩家需要操控主人公与毒娘合作，以重返现实世界。
毒娘
声优：沼仓爱美
在“你” 误闯地狱后夺走 “你” 身体的女孩。时常摆出一副坏人嘴脸，但其实相当重感情且清纯容易被感动。嘴巴上说着「到了天国，我就会许愿让你回到人世！」，催促主角前往天国，其实打算前往天国好实现自己的愿望。
主角
要与毒娘一起净化地狱的你。即使察觉到毒娘对自己的身体虎视眈眈，但仍为了找出自己来到地狱的理由而协助她。
丧服少女
声优：川上ゆき
在地狱遇见，与毒娘共享肉体的少女。虽然同为前往天国的竞争对手，但因为个性开朗好强，时常对主角们伸出援手。被拍档白色毒娘的遭遇跟志向深深打动，主动协助毒娘净化地狱。天性温柔也有点傻的女孩。
白色毒娘
声优：高川みな
与丧服少女共享一具肉体的「毒娘」。把帮助自己前往天国的丧服少女尊称为“大小姐”。由于丧服少女个性天真无邪，让她时常展现出宛如监护人的举动。性格冷静，不苟言笑。
三途川奴罗美
声优：荒井静香
在地狱的电波塔附近经营土产店的鬼女。但很少有活人造访此地，因此她主要负责将亡者“引渡” 至天国。浑身充满身为女性的性感魅力。
在地狱遇见的神祕女性
声优：澄川里佳子
身穿礼服，宛若男装丽人的神祕女性。似乎知道刚到地狱没多久的主角跟毒娘底细，常用语带玄机的口吻与他们交谈。
黑色毒娘
声优：原由实
在地狱遇见的神祕毒娘。一般而言，「毒娘」是指与活人共享肉体的妄者，却没看到她身边有活人作拍档。个性随兴、一口京都腔、举止我行我素，同时也散发深藏不露的气场，令人觉得有些诡异。
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